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不同培养基的体积对抑菌圈的影响大
发布时间:2018-12-11   点击次数:118次
       不同体积培养基对抑菌圈大小有一定影响,抑菌圈会随培养基体积的增加而变小,培养基体积15 mL时为佳值。试验人员应注重量化培养基的量以减少试验误差。为了判断这一结论的准确性,我们可以通过一下的试验来进行鉴定。本试验正是通过制备不同体积的培养基来观察其对抑菌圈的影响。
  1.试验仪器及材料
  试验仪器:二级生物安全柜,生化培养箱,高压灭菌锅,恒温水平摇床,移液枪。
  标准菌株:ATCC6538金黄色葡萄球菌,8099大肠杆菌。
  试样:1.5 cm×1.5 cm规格,灭菌处理。
  平板计数琼脂,PBS缓冲液。
  2.试验方法
  (1)接种液准备:按照标准规定,用PBS缓冲液稀释细菌悬液至1×106cfu/mL~5×106cfu/mL。
  (2)培养基准备:分别用移液枪制备10 mL、15mL、20 mL、25 mL四个不同体积的培养基各6个(3个用于ATCC6538金黄色葡萄球菌,另3个用于8099大肠杆菌)。
  (3)试样接种:用无菌棉拭子蘸取接种菌液,在平皿的培养基表面均匀涂抹3次,每涂抹1次,平皿转动60°,最后将棉拭子绕平皿边缘涂抹一周,盖上盖子,置室温干燥5 min。
  (4)贴试样:将试样平贴在培养基上,用无菌镊子轻压试样,使其紧贴培养基表面。每个培养基贴一块试样于中间位置。
  (5)培养:倒置平皿,放入生化培养箱中37℃培养16h~18 h。
  (6)测量:测出每个平皿中的抑菌圈外沿总宽度及试样总宽度,进而算出抑菌圈宽度,求出平均值。
  从试验结果可看出,不同体积的培养基对抑菌圈的影响还是比较大的。培养基体积为10 mL和15 mL时,抑菌圈相差不大,但当培养基增加到20 mL时,抑菌圈骤降,下降率超过20%。总体来说,随着培养基体积的增加,厚度也增高,但抑菌圈却反而变小。原因可能是体积增大,越多的抗菌剂渗透到了培养基底层,从而影响了表面的抑菌圈大小。
  3.结论
  由以上试验可以看出掌控培养基的体积是准确测量抑菌圈的一个关键点。以15 mL为准,10mL~15mL都是合适的。培养基太少不能覆盖平皿底部,多于15mL会使结果低于实际值而把不合格样品误判成合格品。因此,在试验时,应准确量化培养基的量,可采用移液枪或量筒来定量,而不能光靠经验和感觉来定量培养基体积。

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